Сотрудники Университета им. Бар-Илана (Израиль) в настоящем времени наблюдали в клетках человека дело выработки протеина, соответствующего отдельному гену.
Ранее специалистам, изучавшим синтез белков, доставалось работать с данными, усреднёнными по времени и по огромному объёму каморок. В конце прошлого века имелась предложена методика маркировки генов, которые приобретали возможность подавать флуоресцентный сигнал в момент транскрипции (создания разъяснительной РНК — матрицы для получения белков). Это дало возможность анализировать функционирование некоторых генов в бактериях и одноклеточных организмах, но не в клетках млекопитающих.
Главной проблемой начало то, что копии помеченного гена, доставляемые в каморку, встраивались в геном случайным образом: некоторые области последнего показывают естественный высокий темп транскрипции, а другие, напротив, «хранить безмолвие», и всё это мешает изучать работу самих генов. «Геномы наших клеточных линий содержат последовательность, тот или другой служит своего рода целью для вносимых последовательностей, — рассказывает Ярон Шав-Таль (Yaron Shav-Tal), один из авторов анализируемой работы. — Теперь можно не беспокоиться о том, куда-нибудь попадёт ген».
| Участки транскрипции в живых клетках, помеченные с помощью зелёного флуоресцентного белка. Масштабная полоска — 5 мкм. (Иллюстрация авторов произведения.) |
Израильтяне основали две несколько отличавшиеся друг от друга черты эмбриональных клеток почки с «искусственной» версией гена cyclin D1, регулирующего клеточный цикл. Обе имели последовательность ДНК, коя разрешает флуоресцентному белку, экспрессируемому в каморках, связываться с РНК cyclin D1 в момент транскрипции. При этом первый вариант линии содержал естественный промотор — участок приземления фермента (полимеразы), осуществляющего соединение информационной РНК на матрице ДНК, — гена, а второму попал вирусный промотор, который сверхэкспрессирует гены.
Подготовив материал для изучения, биологи проследили влияние промотора на динамику транскрипции. Как оказалось, в «нормальных» клетках процесс любые 200 минут останавливался примерно на 20 минут, тогда как клетки с вирусным промотором сохраняли активность в направление 10 часов. «Это совершенно новый ватерпас детализации, — заключает г-н Шав-Таль. — Даже если клетки считаются идентичными, у каждой из них всё одинаково, как мы теперь понимаем, будет свой уникальный набор параметров экспрессии».
Толстая версия отчёта опубликована в журнале Nature Methods.
Страницы:[1] 2
Вася комментирует:
С большего, автор оригинально опубликовал!
26.10.2010
Петя комментирует:
Как обычно, тот кто писал убого накреативил!
14.01.2012
